石斑鱼受精卵洗卵方式形形色色

近几年，透过垂直感染，神经坏死病毒肆虐，石斑鱼苗培育成为富贵险中求的行业。白身苗场购入受精卵后要经过洗卵消毒，去除附着在卵壳上的细菌及病毒，阻绝感染病原，提高鱼苗育成率。洗卵方式形形色色，育苗场各凭本事。
 
石斑鱼为亚太地区最重要的养殖鱼种之一，2007年FAO统计，全球养殖石斑年产量超过7.5万吨，2009年台湾石斑生产13,480公吨，鱼苗年产量约5,000万尾，石斑产业总产值接近台币50亿元。
 
卵至白身苗存活0.3%以下
 
石斑鱼养殖起源于香港，台湾于 1972年在澎湖开始蓄养，至今已有三十年的养殖历史，主要养殖种类有点带石斑、马拉巴石斑、龙胆石斑、老虎斑、芝麻斑、金钱斑、老鼠斑、七星斑等，其中以点带石斑、马拉巴石斑的产量最多。
 
台湾的石斑鱼苗养殖始自1982 年，鱼卵源自野生种鱼，在1984-1985年以室内型态育成马拉巴石斑寸苗上万尾。1987年利用养殖的种鱼，以室外型态育成近百万尾鱼苗，1995年生产约2,600万尾。
1994年初，台湾南部许多养殖场发现石斑鱼苗在孵化两周后大量死亡。水试所东港生技研究中心苏惠美博士表示，经由对病原体的研究分析，发现为感染病毒性神经坏死症。病变发生于各阶段鱼龄，感染程度以孵出十几天之鱼花最严重，发病快速且死亡率相当高。
 
1996年因病毒性疾病蔓延，减为1,500万尾。石斑苗受VNN的影响相当严重，以2002年的石斑产量估算，种鱼场约10余户，年产约16-40公吨重卵，鱼苗生产业者800余户，生产 6,600万尾寸苗，及3,300 万尾二寸苗估算，卵至白身鱼苗之活存率仅 0.1-0.3%，至二寸稚鱼约0.15-0.05%。
 
台湾的石斑鱼养殖是分工精细的产业，主要分为四阶段，第一阶段为种鱼场，第二阶段为白身场，第三阶段为2寸场，第四阶段为养成场。种鱼场养殖成熟的亲鱼，专门生产受精卵卖给下游的白身场，白身场将卵孵化养至7-8分以上，再由2寸场培养到2-3寸，最后由养成场接手养到1台斤到1公斤的上市规格出售。
 
白身场购进受精卵后，经过洗卵、消毒、放卵，在低光度下约经过3天，幼苗会靠卵黄发育成型，这期间不会进食。接下来，有些会换池，有些不换池直接开始加水，期间的肥水浓度及微藻种类各自凭靠经验使用SS轮虫、光合菌、氨基酸等当作初期饵料，稍大后就使用桡脚、丰年虾等。
 
病毒附着在卵壳表面
 
研究指出卵的消毒可降低将母鱼所带有之细菌及病毒传播到不同鱼苗场育苗池的风险。以前台湾大多数均未有这类操作，欧洲早期使用优碘，随后改用 glutaraldehyde，日本使用臭氧消毒法，而近年来各国采用臭氧消毒法者逐渐增加。欧美及日本等国家对鲑鳟类的研究指出，消毒可以有效的去除鲑鳟类鱼卵卵膜上所附着的细菌与病毒，可以增加鱼卵的孵化率与孵化后的活存率。
目前，国内业者洗卵消毒的方法有碘剂、硫酸铜、二氧化氯、漂白水、双氧水、臭氧、紫外线、电解海水、光触媒等，甚至有“独家配方”，业者通常会尝试多种洗卵方式，在其中找出一种自己认为最合用的。各种消毒剂及机械设备的使用成本有很大的差别，杀菌物质的浓度、浸泡的时间、操作手法以及效果也有相当大的差异，优胜劣败，并无定论，大家各凭本事。
 
“虹彩病毒主要是透过水平途径传染，神经坏死病毒则是垂直感染，所以卵的消毒效果是值得期待的防治重点。比较恰当的洗卵时间是眼胞期后，大约是受精后18小时。”周信佑老师说，卵壳有保护作用，如果表面有病毒，在开始孵化时，会侵入胚胎，造成胚胎死亡或鱼苗畸型等。因此，表面冲洗干净及适当的消毒，可以提高孵化率及育成率，白身苗场一定要进行卵的消毒。“有洗就有效，不管采用哪一种方式，有洗卵的、洗的时间及方式都对的话，鱼苗育成率都绝对比没有洗的来的好。”海洋大学石斑研究团队与水试所海水繁养殖研究中心合作，测试了不同孵化时期石斑鱼卵对洗卵操作的耐受试验。结果显示，前期的囊胚与原肠期对人为操作的耐受性低，孵化率不到5成，之后的眼胞期、胚体形成后期及胚体抽动三期的孵化率则维持在80%以上。因此建议如果要进行洗卵消毒，最好选择在眼胞期之后开始施行，时间大约是受精后15-18小时之后。
 
成功大学杨惠郎教授指出，NNV主要附着在卵壳表面，使用适当的方式可以加以去除，成功大学生物科技研究所采用物理与化学并用的方式处理。“不论用哪一种方式，最重要的是不要伤到受精卵，以免影响胚胎孵化。”
 
洗卵各凭经验
 
高雄市林园区的石斑鱼繁殖业者林增先生的洗卵方式是以奈米银产品10ppm处理15分钟，结果显示孵化率及鱼苗育成率都较高，洗卵前卵壳所带的病毒和海洋弧菌也都能去除。过去他也曾使用臭氧海水对石斑受精卵洗卵1分钟，能杀死NNV，孵化率也可以。但是臭氧处理育苗池水要注意溴氧化物的残留，不然对仔鱼可能产生不良影响，然而奈米银就没有这种后遗症。
 
以斯帖公司许经理表示，他们委托台湾海洋大学水产品产销履历验证暨检验中心在2011年6月以25ppm浓度奈米银产品处理黑鲷受精卵10分钟也不会对孵化率造成影响，可说是相当优良的洗卵杀菌剂。
 
“有研究指出，水体中病原菌达103 CFU/mL即可让水生动物致病，而病原菌达105 CFU/mL则表示水质已相当恶劣，海洋大学水产品检验中心在2011年7月实验结果证实以8ppm奈米银产品在10分钟内能有效的杀死103 CFU/mL的海洋弧菌，30分钟内能有效杀死高达105 CFU/mL之海洋弧菌。”以斯帖公司许经理说。
 
水试所以二氧化氯处理10分钟，探讨其对孵化前期胚体卵之耐性试验，显示1ppm以内的二氧化氯为其安全浓度，建议育苗用水之消毒可以参考使用。
 
水试所方面表示，二氧化氯会受pH值、水温、悬浮物质及有机物含量的影响，使用时应依处理后至放卵时间适度调整，消毒杀菌后宜充分曝气以去除残氯。还有残氯之挥发及毒性与环境温度有关，放卵前最好先以受精卵或鱼花测试，确定安全没有疑虑后再下卵。

通常业者会尝试各种洗卵的方式，最后选择自己感觉最合用药剂、浓度与时间。有业者使用消毒药性较强的硫酸铜0.1ppm浓度浸泡10秒钟处理，业者认为成本便宜效果又好。
 
海洋大学周信佑老师的学生周佳璇曾与水试所海水繁养殖研究中心合作，在2005年10月至2006年4月进行了石斑种苗生产期之虹彩病毒防除对策研究。研究结果显示，碘消毒处理的效果最佳，相较于控制组，鱼苗活存可提高约20%-30%。因此建议在进行石斑鱼种苗时期的虹彩病毒防除时，以50ppm碘处理眼胞期的受精卵10分钟后，能提高其孵化率及活存率。不过，使用化学药剂，有成本及安全性方面的因素需加以考虑。
 
臭氧洗卵0.3ppm1分钟
 
水试所东港生技研究中心在四次石斑鱼卵的洗卵孵化试验中，直接将鱼卵投入饲育槽孵化，所孵出的鱼苗数目极少，且在槽底部发现大量的死卵，估算其孵化率则尚不及1成。当以去TRO的臭氧处理水洗卵的石斑鱼卵孵化率为100%，显示洗卵孵化大大改善孵化率。

水试所东港生技研究中心苏惠美博士表示，该中心以0.1ppm TRO臭氧水处理1-10分钟，孵化率都大于90%，但是鱼苗活存率随浸泡时间增加而降低。以0.5ppm消毒则孵化率明显偏低，且有68%出现延迟孵化的现象。实验结果发现，0.3ppm消毒1分钟，为合适的操作方法。臭氧处理水洗卵与UV比较，孵化率高出约 6-11%。“实验研究也发现，石斑鱼卵开始孵出时水中的总生菌量与弧菌量增加最多，孵化完毕时，以较大的进流水量洗卵，总生菌数有减少的趋势；2-3L/分钟进流水量，水中的总生菌量则成小幅度增加。”
高雄林园的白身苗业者阿国也是用臭氧洗卵。他说，学术研究建议是用0.3ppm浓度臭氧浸泡1分钟，他们则是采0.2ppm 90秒处理，浸泡分2次，每次45秒。“每次进卵后，先用干净海水彻底冲洗一遍，再用臭氧处理过的海水浸泡45秒。冲洗、浸泡步骤再重复做一次以后才将卵放入育苗池孵化。”阿国说，他们用臭氧的方式育苗成绩相当稳定。2011年11月刚迁来林园后感觉水质条件稍微差了些，第一批1公斤点带石斑卵只培育出2万尾左右的白身苗。这批苗因场内池子都还空着，就留下来以到2寸再处理。
 
日本奄美栽培渔业中心的研究结果也显示，使用的臭氧海水，对黑鲔受精卵洗卵1分钟，即能杀死NNV。黑鲔VNN主要为垂直感染造成，如果未能排除此种垂直感染的话，就无法制止VNN的发生。目前的技术并无法排除来自黑鲔亲鱼的病毒，因为在受精卵上附带有病毒。
 
电解海水与光触媒未来可期待

海水电解后会产生氧化剂，可作为海水杀菌之用。日本奄美栽培渔业中心用电解海水来进行黑鲔受精卵的消毒。电解海水因水中含有氧化剂的残留，会对仔鱼产生不良影响，故不能直接作为饲养水使用，需以活性炭处理除去残留的氧化剂后，才可作为养殖用水。
 
周信佑老师表示，电解海水是很好的一种处理水做为洗卵的方式，但是缺点是设备的制造成本较高，在日本要日币数十万到百万元，视处理海水量的机型大小而定，如果直接自日本引进台湾的话也不会太便宜，目前似乎还没有引进做水产养殖之用。
 
另一项海大的研发成果是光触媒技术。“这项技术如果能落实到商业化生产，会是便宜又有效的消毒方式，未来发展潜力无穷。”周老师说，今年将向政府有关单位提产学合作计划，通过后才能制造原型，并进行设备的测试。现今的光触媒的光源仍是利用紫外线杀菌，而台湾海洋大学石斑鱼研究团队已研发用可见光就可以杀菌的技术。

周老师也指出，他们有电解海水及光触媒的研发成果，但是在制造业界的人脉及信息不足，还没找到合作的厂商，将研发成果商品化，欢迎有兴趣的业者与台湾海洋大学水产养殖系联系，做进一步的洽谈。
 
鱼苗育成率牵涉因素多
 
事实上，洗卵仅仅是育苗业者进卵后一连串操作中的第一个步骤，鱼苗的育成率的高低，还牵涉到：（1）水质环境；（2）孵化管理；（3）初次摄食时间掌控；（4）初期饵料（嗜口性、大小、营养）；（5）饵料来源；（6）饵料清洗及消毒；（7）投饵量之掌控；(8)水质监测与管理；（9）NH4+-N及NO2--N 之去除；（10）鱼苗分级与预防残食。
 
高雄林园的白身苗场业者阿ㄆ说，繁殖鱼苗的前置作业很重要，会影响放养后鱼苗孵化的成功率。海水的处理增加海水的硬度，大量曝气3天以上，海水的比重20-25，温度，pH值7.8。下卵后加温棒要关闭，第3天一定要下轮虫，光照要够。鱼苗黑肚后要马上有饵料可食，不然一封口鱼苗就不食饵了，过料过程会比较差。第18天开始收翅也是关键，营养、含氧量都要够。
 
种鱼业者黄明忠认为石斑鱼苗育成率的低下，主要和气候有关，天气忽冷忽热、阴晴变化不定，孵化成绩一定差。业者邱宏茂也说，温差大对育苗非常不利，点带石斑卵全年都有生产，育苗业者大可不必抢头香冒风险，不妨等气候稳定了再出手。　　
周信佑老师最后也强调，光是依赖养殖一个环节是无法解决石斑育苗困难的问题。因此，海洋大学的石斑鱼研究是由一个含括了养殖、病理、食品、环境、机械与机电等等科系的团队所组成，希望学术上的研究成果能为产业做出一些帮助。
 
致谢
 
本期特别报导蒙台湾海洋大学周信佑老师、东港生技研究中心苏惠美博士、成功大学杨惠郎教授以及业者高瑞国、曹俊清、吴培佑，林增、阿ㄆ、黄明忠、邱宏茂、小郭等热心提供数据、图片及协助采访，特此致谢。

文/图 《养鱼世界》 郑石勤