不同能量水平下添加晶体DL-蛋氨酸对罗非鱼生长性能及体组成的影响

中国水产门户网报道氨酸的需要量随着饲料中能量水平的升高而升高；低能水平下（16.86 MJ·Kg-1）罗非鱼对蛋氨酸的需要量为0.80%，高能水平下（17.82 MJ·Kg-1）罗非鱼对蛋氨酸的需要量为0.93%。

　　
　　文/ 赢创德固赛（中国）投资有限公司 高文 董延
　　
　

　　
　　蛋氨酸是鱼类的必需氨基酸（EAA），在体内可直接或间接参与蛋白质的合成。蛋氨酸的缺乏会影响机体氮平衡，导致养殖鱼类的生长速度下降，饲料效率降低，某些鱼类还会出现白内障（Walton等，1982；Keembiyehetty 和Gatlin III，1993）。通常来说植物蛋白源饲料的第一限制性氨基酸是蛋氨酸（Goff和Gatlin III，2004），在饲料中添加的晶体蛋氨酸可被鱼体有效利用（Ai和Xie，2005；Takagi等，2001；Mambrini等，1999；林仕梅等，2008）。

　　
　　已有研究表明，增加饲料中非蛋白能量的水平能够提高可消化蛋白质的利用率，这是由于增加的非蛋白能源提供了能量消耗（Cho和Kaushik，1985, 1990）；也可能是能量的增加一定程度上提高某些限制性氨基酸的利用效率，使之尽可能多地用于N的沉积（Schroeder等，2007；Schroeder等，2006；Encarna??o等，2004）。通过对鲑鳟鱼、罗非鱼、草鱼等的试验表明，在一定程度范围内提高饲料脂肪含量均可明显提高鱼类生长率、饲料效率与蛋白效率。另有报道，饲料能量含量会影响鱼类的摄食，高能量饲料会导致摄食量降低从而对EAA有更大的需求（Rodehutscord等，2000）。生产实践中，廉价的能量饲料原料已经越来越广泛地应用于水产饲料，但能量水平的高低对饲料中的EAA尤其是限制性氨基酸的利用有何影响？这是值得研究的问题。

　　
　　本实验以奥尼罗非鱼（Oreochromis niloticus×Oreochromis aureus）为实验对象，研究两种不同能量（GE）水平下添加晶体蛋氨酸（Met）对罗非鱼生长、饲料利用和体组成的影响。实验共设计了10组等氮饲料（31%），以豆油为能量源，其中1-5为低能组（16.86 MJ·Kg-1），通过额外添加晶体DL-蛋氨酸使饲料Met含量分别为0.49%、0.55%、0.62%、0.80%、0.99%，6-10高能组（17.82 MJ·Kg-1），通过额外添加晶体DL-蛋氨酸使饲料Met含量分别为0.47%、0.55%、0.65%、0.83%、0.93%。实验共分10组，每组设3个平行，每箱30尾鱼，初始鱼重为8.95±0.06g，实验周期为8周。实验结果表明：罗非鱼对蛋氨酸的需要量随着饲料中能量水平的升高而升高；低能水平下（16.86 MJ·Kg-1）罗非鱼对蛋氨酸的需要  量为0.80%，高能水平下（17.82 MJ·Kg-1）罗非鱼对蛋氨酸的需要量为0.93%。

　　
　　一、材料与方法
　　
　　1、实验饲料及实验设计
　　
　　饲料配方及营养组成如表1，各实验饲料氨基酸组成分析结果如表2。饲料为实用等氮饲料（蛋白水平为31%），以豆粕、棉粕、菜粕等几种植物蛋白原料作为蛋白源，通过调整豆油、面粉和米糠粕设置出两个能量水平（低GE：16.9MJ·kg-1；高GE：17.8MJ·kg-1），每个水平下分别添加0%、0.10%、0.20%、0.40%和0.60%的DL-蛋氨酸，使得每个能量水平的蛋氨酸含量分别为0.48%、0.58%、0.68%、0.88%和1.08%（实测值则为0.48%、0.54%、0.64%、0.82%和0.96%）。

 

　　
　　将原料按表1配方中的比例准确称取后，用搅拌机（A-200T Mixer Bench Model unit，Russel Food Equipment Ltd.，Canada）搅拌15min，之后加入豆油和大豆卵磷脂，同时搅拌并加入400-500g·kg-1的水分，饲料通过双螺旋挤压机（华南理工大学化工学院，中国）挤压出来。饲料粒径为2.5mm。饲料经制粒，晒干后储存于-20℃，直至使用。

　　
　　饲料粗蛋白、粗脂肪、灰分、总能的测定方法分别为凯氏定氮法（1030-Auto-analyzer，Tecator AB，Sweden），索氏抽提法（HT6，Tecator AB，Sweden）、马福炉550℃灼烧法和氧弹法。原料和饲料的氨基酸组成用氨基酸自动分析仪（Hitachi，Model 835-50，Hitachi，Tokyo，Japan）分析。

　　
　　2、实验鱼与饲养管理
　　
　　实验用罗非鱼购自广州番禺公司，平均体重为8.95±0.06g。实验鱼均饲养在室内循环水族箱中，实验用水经珊瑚沙和生化棉过滤，采用低压鼓风机提供氧气，溶氧水平维持或接近饱和，水温为29±1℃，氨氮小于0.04mg·L-1，pH为7.9±0.1。

　　
　　商用饲料暂养两周后，选择大小均匀、体格健壮的幼鱼随机分配于30个水族箱（10个处理组，每组3个重复），每箱25尾。每天投喂2次（09:00，16:30），接近饱食的定量投喂。试验持续8周。

　　
　　3、样品采集及化学分析
　　
　　实验开始前随机取20尾鱼保存在-20℃用于体组成分析。实验结束，将鱼饥饿24小时后称重记录作为终末体重（FBW），以进行生长指标计算。经麻醉剂（MS-222，10 mg·L-1）麻醉后，取2尾用作全鱼组成分析；6尾解剖并称内脏、肝脏和肠系膜脂肪重量。

　　
　　取得所有样品后即刻称重记录并在105℃烘箱中烘至恒重，以测定水分含量，之后放入干燥器中保存待测。全鱼、肌肉、肝脏和粪便样品常规测定同饲料。饲料和粪便中Y、P的含量用等离子体原子发射光谱仪（IRIS，America）测定。

　　
　　4、计算与统计分析
　　
　　增重率（WG） =100 ×（末均重－初均重）/ 初均重
　　
　　特定生长率（SGR）=100 ×（ln（末均重）－ln（初均重））/ 天数
　　
　　摄食量（FI） = 投喂总干重 / 尾数
　　
　　饲料效率（FE） =（末均重－初均重）/ 投喂饲料干重
　　
　　蛋白质效率（PER） =（终末体重-初始体重）/蛋白质摄入量
　　
　　蛋白质保留率 =100× 实验结束时每尾鱼蛋白增加量 / 每尾鱼蛋白摄入量。
　　
　　能量保留率 =100 × 实验结束时每尾鱼能量增加量 / 每尾鱼能量摄入量
　　
　　肥满度（CF） =100× 体重 / （体长）3
　　
　　脏体比（VSI）=100 × 内脏重 / 体重
　　
　　肝体比（HSI）= 100 × 肝重 / 体重
　　
　　脂体比（IPF）=100× 肠系膜脂肪重 / 体重

　　
　　本试验中所有数据均用3个平行的均值±标准差表示，并用单因素方差分析（ANOVA）（n=3）检验试验处理的影响。对Met和DE进行双因素方差分析（Univariate analysis of Variance），并检验它们之间的交互作用。统计软件为SPSS13.0。采用Duncan’s（1955）多重比较来检验试验处理均值间差异的显著性。当p<0.05时，表示均值间差异显著。

　　
　　二、结果
　　
　　1、生长和摄食
　　
　　由表3可知，饲料Met和GE水平对罗非鱼的末重、增重率及特定生长率均有显著影响（p<0.05），但两者间无交互作用（p>0.05）。WG和SGR随饲料中Met含量的增加而显著提高（p<0.05），在低GE组添加0.4%Met获得最大生长，但进一步提高蛋氨酸含量至0.6%，罗非鱼的生长性能有所下降，在高GE组添加0.6%获得最大生长；在同一Met添加水平下，高GE组的生长性能高于低GE组（p<0.05）。




　　
　　罗非鱼的摄食量与WG、SGR 呈相似变化；而饵料系数在各组间均没有显著差异（p>0.05）；根据双因子分析，饲料中的Met水平和GE水平显著提高了蛋白质效率、蛋白保留率和能量保留率（p<0.05），但两者间没有交互作用（p>0.05）。在低GE水平下，0.2%Met添加组的蛋白质效率、蛋白质保留率和能量保留率显著高于0.4%添加组（p<0.05），其他各组之间差异并不显著（p>0.05）；在高GE水平下，蛋白质效率、蛋白质保留率和能量保留率随着Met含量的增加而显著上升（p<0.05），且高GE水平下各组的能量保留率显著高于低GE组（p<0.05）。

　　
　　2、罗非鱼形态学指标
　　
　　如表4所示，罗非鱼的肥满度和肝体比不受饲料Met和GE水平影响，各组间没有显著差异，且不存在交互作用（p>0.05）。随着GE的增加，同一Met水平的脏体比和脂体比显著上升（p<0.05）。

　　
　　3、鱼体生化成分
　　
　　罗非鱼鱼体生化组成结果见表5。饲料的Met水平对罗非鱼的体组成没有显著影响（p>0.05），而饲料中能量水平的增加显著提高了全鱼和肝脏的脂肪含量（p<0.05），从而在一定程度上降低了全鱼水分、肌肉蛋白和肝脏水分的含量。

　　
　　三、讨论
　　
　　作为蛋白合成的重要元素，蛋氨酸的缺乏会造成体蛋白沉积下降。在鱼类中，当饲料中的蛋氨酸不足或者过量时，均会影响其摄食、生长及体组成（Sveier等，2001；Mambrini等，1999；林仕梅等，2008）。林仕梅（2008）报道，在实用饲料Met水平为0.45%的基础上添加0.1%晶体蛋氨酸，罗非鱼的特定生长率达到最大，蛋白质沉积率随着添加水平的增加而显著提高，实用饲料中补充的晶体蛋氨酸是能够被罗非鱼有效利用的。本实验中，在各能量水平下，Met的添加显著提高了罗非鱼的增重率和特定生长率，与上述结果一致。Takagi等（2001）研究发现，在真鲷幼鱼的大豆蛋白浓缩物饲料中添加Lys、Met、Lys+Met，只有添加第一限制性氨基酸Met或Met+Lys，才能显著提高真鲷幼鱼的生长，仅添加Lys甚至会带来负面影响。

　　
　　Encarna??o等（2004）研究发现，在两个DE水平下，虹鳟的增重率均随饲料Lys水平的增加而增加，通过线性回归分析得出，两个条件下的Lys的需要量是一致的。而本实验中，高GE水平下，随着饲料中添加蛋氨酸水平的增加，罗非鱼的生长性能显著提高，且在0.6%添加组（实际含量0.93%）获得最大生长；而在低GE水平下，随着饲料中蛋氨酸添加量从0%上升到0.4%，罗非鱼的增重率显著上升并在0.4%添加组（实际含量0.80%）获得最大生长，当再进一步增加蛋氨酸含量至0.6%时，罗非鱼的生长性能有所下降。由此可见罗非鱼在高能水平下对蛋氨酸的需求量增大。

　　
　　已有大量研究表明，鱼类的摄食量受到能量的调控，高能水平下导致鱼类摄食量减少（Kaushik and Médale，1984；Yamamoto et al，2000；Bendiksen et al，2002）。然而，在本实验中罗非鱼的摄食并未受到能量水平的影响，这可能是因为本实验中饲料组之间的能量差异较小（0.9kJ·g-1）。Gélineau 等 （2001）研究表明，只有当饲料组之间的能量差异达到2.2 kJ·g-1以上的时候，鱼类的摄食活性才会有明显的变化。

　　
　　另外，高GE组的增重率（802%-903%）和特定生长率（3.92% d-1-4.12%d-1）显著高于低GE组（797%-848%，3.92% d-1-4.02%d-1），本实验室研究亦表明，在一定的蛋白下，随着豆油添加水平从2%提高至7%，罗非鱼的生长水平也随之升高。当能量不足时，饲料中的氨基酸会倾向于分解为能量；随着能量水平的增加，氨基酸的利用效率得到提高，更多地用于机体蛋白的合成。本实验中，高GE组的蛋白保留率和蛋白质效率均显著高于低GE组，支持了上述观点。与此相似，Encarna??o等（2004）报道可消化能水平会影响虹鳟对饲料中的赖氨酸的利用效率，同一Lys水平下，20MJ·kg-1 DE组显示出更高的生长性能、Lys的沉积及Lys利用效率（与16MJ·kg-1DE组相比）。Schroeder等（2006）研究发现即使Met不足，通过添加能量仍可以提高肉牛的N的沉积。

　　
　　四、结论
　　
　　以上结果表明，低GE水平时，在饲料Met添加含量为0.80%时，罗非鱼可获得最大生长；而在高GE水平时，在饲料Met含量为0.93%的基础上继续添加Met，仍可显著提高罗非鱼的生长和饲料利用，即随着能量水平的提高，罗非鱼对晶体DL-蛋氨酸的需求量增加。（参考文献略）