淡水养殖南美白对虾区域性主要流行疫病检测分析

　　对虾养殖莫要慌 按部就班科学养

　　“目前，华东战区南美白对虾养殖迎来了新一轮挑战--对虾养殖进入疾病进入持续高发期，而后期的持续阴雨也让疾病防控有了更多不确定制约因素，为了有效防控南美白对虾疫病，苏州通威疾病防控项目组 6月份对上海、苏州片区南美白对虾进行了“急性肝胰腺坏死综合征”和“对虾肝肠孢虫”批量监测，为目前整体养殖疫病进行了分析和总结，为广大养殖户提供有效的防控提供理论和实际操作依据。”

　　一、南美白对虾发病流行病学分析

　　上海、苏州地区南美白对虾养殖相对于周边其他地区，在6月份仍为主要疾病重灾区，主要体现在急性死亡，红体红须，肝胰腺模糊肿胀，死亡前虾体偶见水面顶水、游塘，而水质指标显示却比较正常，部分出现在消毒过后或大蜕壳期间，部分出现在加料或者周边池塘发病后自身池塘也难保。发病率高达4成以上，并且情况仍在恶化。通过大量走访，南美白对虾发病主要有以下几个共同特征：

　　01、发病急，死亡率高，难控制。

　　02、传染性强，相同地区发病现象较为集中。

　　03、水质指标基本正常。

　　在此基础上针对不同养殖户进行了批量检测，意在找出更多的疾病分析共性。

　　二、主要检测手段和操作流程

　　淡水养殖南美白对虾主要操作流程：

　　取样→保存→样本提取→TCBS培养基致病性弧菌培养→细菌肉汤富集培养→DNA提取→聚合酶链式反应(副溶血弧菌检测)→EHP检测→药物敏感试验。

　　样本提取及PCR检测：

　　取样方法：水体采集到10ml离心管中保存备用，底泥采集样本10g，加入去离子水20ml后混匀、震荡3min，15min后3000r 离心机离心3min取上清液。肝胰腺和肠道取出，组织匀浆机混匀、搅拌制成组织匀浆备用。

　　三、检测结果

　　(一)水体、底泥在发病池塘和未发病池塘的弧菌培养情况

　　在不同养殖户水体中，对投饵区料台、塘中进行样本采集，并对相应水体进行弧菌TCBS培养发现，大部分水体中不论在密集投饵区和中间养殖区均未有明显弧菌生长或者弧菌较少，在底泥中也未发现明显的弧菌生长。

　　水体

　　发病水体

　　底泥

　　(二)肝胰腺弧菌TCBS培养基涂布培养

　　未发病肝胰腺

　　发病肝胰腺

　　在肝胰腺批量样本检测中发现，未发病个体肝胰腺弧菌数量很少或者部分较多，弧菌培养出黄色菌落，直径在0.2mm左右，表面光滑湿润，边缘整齐。而发病个体多出现绿色菌落，而前期未发病，后期发病个体也出现了绿色菌落生长。

　　因此，是否为致病性EMS病原-副溶血弧菌进行了Pcr诊断，为了提高诊断的准确性，实验样本均使用水体、底泥上清液和肝胰腺进行DNA提取，培养并对水体、底泥和肝胰腺固体培养基培养进行菌落PCR鉴定。

　　(三)分子检测-对虾急性肝胰腺坏死病-副溶血弧菌检测

　　检测结果显示：所有样本在致病性副溶血弧菌检测中均呈现阴性，操作准确，阳性对照和空白对照均正常。

　　对照组阴性，阳性组正常，28批次样本均为阴性

　　对培养菌落进行重复检测，结果发现不论是黄色菌落还是绿色菌落均呈现副溶血弧菌阴性，检测中仅有一例疑似阳性结果，这与其他地区(盐度较高地区)存在明显差异。

　　同时，对不同水体出现的底泥活体生物等进行检测也呈阴性。

　　证明了水体中、底泥生物、自然稀释度水体、底泥和对虾肝胰腺均未有致病性副溶血弧菌产生或含量很少检测不到。

　　(四)细菌富集培养和药物敏感试验

　　细菌培养在37摄氏度培养18h后，均有明显细菌产生，这与对照组(正常对虾)也会产生细菌，因此是否是致病菌不能得知，但是如果有，那么将会培养出来，对比做细菌药物敏感试验对该病进行预防。

　　肉汤培养物进行细菌药物敏感试验，结果显示：

　　水体和底泥细菌群落相当，药物敏感试验显示:左氧氟沙星、恩诺沙星，氟苯尼考，较为敏感，而肝胰腺中主要以左氧氟沙星>氟苯尼考>恩诺沙星，因此，我们在发病时或者预防时可以适当添加药饵，控制病原体防止发生病变。

　　(五)对虾肝肠孢虫检测发病结果

　　进行同样本核酸提取，然后进行EHPpcr检测，结果发现，大部分淡水养殖(上海、苏州地区)大小不均现象的对虾并非含有肝肠孢虫或者肝肠孢虫含量较低，达不到检测上限。6月份共检测28例，其中阳性两例，样本中同池塘大、小分开检测，其中阳性出现在个体小的虾体中，而个体大的虾体并无检测出。

　　由此可见，阳性样本并非占到非常大的比例，此外由于部分样本采集为个体均匀，因此阳性率较低。但在实际塘口这样的问题引发一个假设：

　　读而思

　　即南美白对虾参差不齐的原因并非单单只因为对虾患肝肠孢虫而引发的，实际上大多数养殖户遇到问题我归咎于虾苗带病，而对虾肝肠孢虫至今研究甚少。因此，各位养殖户朋友不要轻易在未知的情况进行肆意推测和断定不要人云亦云，相应的防控方法仍在研究和试验当中，因此不要轻易相信所谓的“药到病除”，但根据苏州通威合理的防控经验来看，使用我公司活菌底改王进行良好的底质改良能够有一定积极作用。

　　此外，在弧菌肆虐的今天，也不能将大批死亡均归咎到对虾肝胰腺坏死综合征的病原-副溶血弧菌，在对虾养殖过程中，由于虾体本身属于低等生物，对环境的抵抗和自身免疫系统发育并不是很完善，每一个养殖水体的微生态均不相同，并且日常管理、养殖经验和技术水平以及动保使用等均对水体有不同程度的改变，因此，对虾自身健康情况与养殖水质、综合环境因素，管理过程以及饵料、动保使用及底质均有关。

　　在养殖期间，苏州通威提醒广大养殖户朋友要根据科学、合理的养殖方式和养殖方法进行饲养，不要人云亦云，病急乱投医。

　　在对虾养殖过程中，定期拌喂通威乳酸菌+通威多维，活菌底改王加强底质改良，必要时定期拌饵并泼洒蛭弧菌，做到不要盲目使用假冒产品和劣质动保产品，相信通威，走科学养虾的道路。