日本对虾受弧菌感染的发病情况与感染剂量、温度条件的关系

中国水产门户网报道细菌，尤其是弧菌属的若干种是养殖对虾病原体中的主要类群之一。近年来对虾暴发性流行病虽是由病毒引起的，但造成对虾的大量死亡，又常伴有弧菌类的继发性感染。

　　关于弧菌类对养殖对虾感染问题已有相当多的研究报告，如Lishtnerl、郑国兴、王文兴等，其中郑国兴等曾述中国对虾的发病与高温及弧菌数量有密切关系。但有关的实验生物学工作仍较缺乏。为了深人探讨病原菌对养殖对虾的致病条件，我们用从辽宁养殖对虾体内分离出的鳗弧菌(Vibrio anguillarum)研究细菌感染齐量、温度条件，对于B本对虾发病和死亡过程的影响。报告如下。

　  一、材料与方法

　  1.材料

　　鳗弧菌种由中科院生态应用研究所提供。供试虾购于大连附近一养虾场，运回所内经数日暂养后使用。

　  2.方法

　　将培养16--18小时的细菌制成菌悬液，然后用无菌1ml针管将细菌悬液注人到健康虾腹部第一、二节间肌肉中，每尾注射0.15ml。用生理盐水注射对照组虾同一部位。试验在3t水泥池中进行，用控温仪控温、连续充气，每天投饵、换水。供试虾平均体长8.2cm。海水盐度31%。、PH7.9—8.0。

　  3.试验

　　将注射同一菌液浓度的供试虾饲养3个不同温度池中，每组平均水温分别为25T、20T、15T。细菌浓度1.80x108个/ml，每一温度都设对照组。

　  二、结果

　　1.注射同一菌量而培养在3个不同温度池水中的供试虾，大约都在注射后1.5小时后有不同程度反应。开始是虾侧卧，对外来刺激由反应较敏感、能弹跳，但一会又侧卧，到反应迟钝，濒死，最终至死亡。在上述整个过程中主要病症表现在虾鳃部的变化。虾鳃由白色透明逐浙变成暗黄色或土黄色，有些虾鳃中开始出现沉积物并逐渐增多，鳃丝变脆弱，最终鳃丝有程度不同的糜烂。

　　温度越低，供试虾由感染发病至死亡的持续时间越长，死亡高峰持续时间也较长。在15℃下的虾死亡延续6天，而在20℃、25℃下，虾死亡延续时间都是3天。15℃时死亡高峰出现在注菌后第40—60小时；在20℃时死亡基本上出现2个高峰期，第1高峰期出现在注菌后的19--22小时，第2个高峰出现在注菌后的第3天；在25℃时，死亡高峰主要出现在注菌后16—19小时。

　　说明：(1)试验进行到第6天，15℃对照组虾死1尾，但虾外观无异常现象。

    (2)试验组虾不摄食、对照组虾摄食正常。

　　(3)迟钝、不能弹跳、但游泳足可摆动。

　　(4)濒死、游泳足不能摆动，只有鳃的叶瓣丝稍动，心脏缓慢跳动。

　　2.在同一温度下，注射不同浓度的相同菌量的3组供试虾死亡情况相差甚大。试验组1.2.3死亡率分别为100%、22%、0%。开始死亡出现时间大约在注菌后20小时。试验组1死亡延续3天、死亡高峰出现在注菌后的第2天至第3天、试验组2死亡延续7天、没有出现死亡高峰。试验2中死亡对虾的病症及病变过程同试验1。

　　说明：(1)试验中，试验组1虾不摄食，试验组2.3供试虾由开始微摄食到后来摄食有不同程度增加，试验组3摄食明显多于试验组2。
　　(2)试验组3供试虾在注菌后5—6小时死亡1尾，其外观无任何病变症状。分析可能是此虾试验前已不健康，注射的再刺激导致死亡。

　  三、讨论

　　Lightner和Lewis曾报道鳗弧菌是白对虾(Penaeus secghrus)和褐对虾(P.aztecus)的病原菌。Delves－Broughton和PonPard从实验室饲养的患病的中国对虾(P.chine。is)中分离到鳗弧菌。上田和北上也曾从养殖的日本对虾(Pjaponicus)中分离到鳗弧菌。郑国兴等报道弧菌是中国对虾感染红腿病致病菌。王书绵等报告鳗孤菌是辽宁地区养殖对外细菌病害的主要病原菌。上述表明，鳗弧菌是多种养殖对虾感染发病的一种重要弧菌之一。

　  1.感染剂量与感染程度

　　在对虾肌注菌时，有相当量的菌液由于对虾肌肉收缩而喷出。所以进人虾体内的细菌量要低于注射量。在试验2中，注射相同菌量，不同浓度菌液的虾饲养在同一温度时，只有注射菌浓度为4.90X108个/ml一组虾发病致死，而注射菌液浓度在4.90x108--9.75x108个/ml范围的虾不发病或部分轻度感染，经过一段时间后可以逐渐恢复正常，出现自愈现象。这与赵增元等人研究结果一致。

　　本试验表明，相同温度条件下，感染剂量与感染程度密切相关。对虾对侵人体内的细菌有一定的抵御能力。亦即具有初步的或称原始的免疫功能。并非是病原菌一旦侵人对虾体内一定会造成对虾发病死亡。当少量病原菌进人虾体内后，由于虾本身具备的多种免疫机制的作用，如吞噬作用(Phagocytosis)。包掩作用(encapsulation)、形成肉瘤(nodule formation)、以及由病菌细胞壁的多糖激活对虾血细胞内的酚氧化酶原系统(prophenoloxidasesystem)而产生的细胞毒杀作用(CytotoxiCity)等等，完全可以使虾病情减缓。只有当进人虾体内的病原菌达到一定量，它们在虾体内繁殖和蔓延的速度，超过对虾抵御能力范围方能使虾致病死亡。因此对虾本身的健康程度是一种重要因素，在养虾整个过程中除尽力创造良好环境外，更重要应多在增强其虾抗病力上多研究对策，使虾免疫功能提高，减轻致病原的危害作用。

　  2.温度条件与感染程度

　　在本试验温度范围内，温度条件不决定于感染程度，但虾被感染及其死亡快慢与温度条件密切相关，其随温度升高而大大加快，温度相对高时，对虾发病至致死过程较短，这与实际生产中的对虾暴发性流行病致死过程结果一致。