日本盘鲍与皱纹盘鲍杂交育种技术研究

中国水产门户网报道目前皱纹盘鲍养殖生产中出现很多问题，突出表现为种质严重退化，养成周期长，成活率低，抗病力差，尤其是近几年稚鲍病毒性和细菌性疾病大面积蔓延，造成稚鲍大批死亡，严重影响了鲍养殖生产的持续发展。分析原因，主要是过去人工育苗所采用的种鲍往往来自同一海区，经多年繁衍，其亲缘关系越来越近，产生近交衰退，造成种质严重退化。因此，要使鲍养殖业得到稳步发展，就要搞好种质的优化复壮。而利用杂交技术进行种质改良，培育出性状稳定、生长快、抗病力强的鲍是这一产业的关键所在。为此，从1999年开始，我们在荣成市寻山渔业公司育苗场等育苗单位利用日本盘鲍(haliotis)与本地皱纹盘鲍(H.discus hannai)进行了杂交育种技术研究，并取得了较好效果。现将1999—2000年研究情况总结如下：
  1材料与方法
  1.1材料
  1.1.1亲鲍来源
  1999年1月下旬从大连长海县购进皱纹盘鲍亲鲍1000头，规格8cm以上，其中雌鲍450头，雄鲍550头。 1999年2月13日从大连市水产研究所购入日本盘鲍亲的50头，规格10cm以上，其中雌鲍22头，雄鲍28头.2000年1月20日从青岛购进皱纹盘鲍1500头规格8cm以上，其中雌鲍980头，雄鲍520头。2000年1月15日从日本青森县购进日本盘鲍亲的120头，规格8.5cm，其中雌鲍58头，雄鲍62头.
  1.1.2饵料  
    幼体培育用底栖硅藻和人工配合饵料，海上养成用鲜海带、裙带莱等。
  1.1.3试验设备    
   刺激鲍产卵排精用的30w石英紫外线灯管、水槽及采苗板。稚鲍中间培育用的网箱、黑色波纹板。养成用的海上筏架、养鲍笼等。
   l.2方法
   1.1.2饵料培育
    先将培育池、采苗板洗刷干净消毒，于前1年的11月份接种底栖硅藻，并逐步扩大培养，到第2年4月初扩大接种结束。每日换水2—3次，每次1／2～／3，水温保持10～15℃，定期施肥(结合换水进行)，氮、磷比为10∶1，适量补施铁、硅肥等。为防止大型硅藻繁生，光照调在2500～3000lx范围内。定期倒转采苗板方向，以促进饵科均匀繁殖生长。当采苗板上出现挠足类繁殖，在培养池中加1～2×10－6的敌百虫捕杀干净。
   1.1.2亲鲍贮养促熟
    亲鲍自2月初入池促熟，培育密度30—50个／m3，亲鲍入池后每天升温1～1.5℃，升至20℃恒温促熟，待产。每天全量换水1次，换水温差不超过0.5℃，后期不超过0.3℃，并结合清除污物，粪便观察性腺发育情况。每天上午换水结束后投入新饵料，以新鲜海带为主，每天投喂量一般按亲鲍体重的30％，同时结合水温及摄食情况随时加以调整。为了改善水质，增加溶解氧，形成水流，有利于性腺的发育，促熟期间需要全天连续充气，充气量不少于1m3／小时。鲍具有背光性，暗光或黑暗状态对亲鲍的摄食、活动有利，故一般光照控制在100lx以下。要保持室温恒定，当有效积温达到300~400℃时，挑出雌、雄鲍，分别促熟暂养，每天做好有效积温和摄食记录。
   1．2．3采卵、受精、孵化
   1999年4月12日，贮养的皱纹盘鲍在有效积温达800℃时自然产卵，日本盘鲍在有效积温达到1250℃时，经人工刺激后排精。 5月3日通过人工刺激，促使皱纹盘鲍和日本盘鲍分别产卵、排精，进行正向杂交。5月15日和6月2日亦以刺激法诱导日本盘鲍和皱纹盘鲍产卵、排精，进行反向杂交。将采集的卵子集中定量，待卵下沉后排掉上层清水，然后按每个卵子10000个左右精于加入受精，边加精边搅动海水，半分钟受精结束，用新鲜过滤海水洗卵数次，以除去多余精子。然后，将受精卵移入孵化池，放卵密度为20～30个／ml，在胚体上浮前每6～8小时换水1次，每次3／4，水温保持18～20℃。
   1．2．4采苗、稚鲍前期培育
    将后期面盘幼体每筐架投放1万～l．5万个，3天后附着结束，附苗率为30％左右，平均每张采苗板附着量为200～300个。稚鲍前期培育确保水质优良，每天换水3次，每次的交换量为培育水体的8倍以上，前期水流要缓，待全部附着后适当增加流量。水温为18～20℃。为使底栖硅藻不断增殖，以保证幼鲍饵料供应，每天清晨结合换水施以氮1×10-6、磷0.1×10-6。光照控制在1500～3000lx。
   1．2．5稚鲍后期培育 
    附苗后35天左右，稚鲍规格达2～3mm时，逐步剥离并转移到网箱培育。剥离方法用2％的酒精海水麻醉法。剥离后，1天24小时常流水，流水量为10个量程以上。投人工配合饵料，每天傍晚前投喂1次，投喂量根据稚鲍摄食情况随时调整。每天清晨坚持清污，除去残饵和死苗，定期倒池，洗刷网箱。稚鲍人箱后约2个月以上，平均壳长9mm左右，由于个体间出现较大差异，此时进行剥离筛选分级，选用2级网目的筛网，1次分离出3种体长规格，将大、中、小个体分开单独饲养。   
  1．2．6鲍的中间育成
    当年11月份水温6～8℃，剥离筛选壳长＜1cm、壳长1～1．5cm和1．5～2cm、2～2．5cm以及3cm以上5种规格，进行室内水泥池越冬中间育成。中间育成密度与鲍苗大小有关：壳长＜1cm，中间育成密度3000～4000个／m2；壳长1～1．5cm，密度2000～2500个／m2；壳长1．5～2cm，密度为1000～1500个／m2；壳长2～2．5cm，密度为750～1000个／m2；2．5cm以上500～750个／m2。鲍苗入池后，每天升温1℃，升到7.8℃恒温流水培育，海水预热后循环使用，循环量每天8倍以上。每天下午4：00～5：00投饵，海带的投喂量为鲍体重的10％～20％。要根据水温变化及幼鲍状态随时调节投喂量，避免投喂过多，浪费饵料，影响水质。发现鲍不上板，并出现死亡时，马上更换波纹板和网箱。换下的器材和工具用50×10-6的高锰酸钾消毒，消毒后在日光下曝晒2～3天后使用。发现鲍苗有病时，投喂药饵或进行药浴：药饵采用土霉素等药品，将药品溶解后混入饵料中投喂，2～3天为1疗程；药浴用四环素、链霉素等，一般5×10-6左右，药浴时间至少6小时，药浴时充气。
    2结果
    2.1　1999年培育杂交鲍苗情况
    从附着到剥离(2～3mm)成活率40％。剥离后再培育，当鲍苗规格达1cm以上时，再剥离，筛选分级，成活率达60％。经多次筛选分级培育，共育1cm以上杂交鲍苗600万粒，单位水体出苗4286粒。1999年的试验证明了将本地皱纹盘鲍与日本盘鲍进行杂交，能够培育出具有杂种优势的子一代鲍苗，其性状明显优于皱纹盘鲍自交培育的鲍苗，且杂交组合中以正交皱(♀)x日(♂)组合最好。    
    2．2　2000年培育杂交鲍苗情况
    从附着到剥离(2～3mm)成活率达45％。剥离后再培育，当鲍苗规格达1．0cm以上时，再剥离，筛选分级，成活率达65％，从7月中旬开始底播增殖小规格苗200余万粒，育出1cm以上商品鲍苗6加万粒。
   2．3　杂交组(正交和反交)与自交组从受精到2～3mm
     剥离情况比较(见表1)
    从表1可以看出，杂交组与自交组受精率与孵化率基本相同，而附苗率与附苗后的成活率相差较大，其中正交皱(♀)×日(♂)较反交皱(♂)×日(♀)的杂交效果要好。从附着到2～3mm剥离，杂交组体现出附苗率和成活率高的明显优势。2.4　剥离后成活率及越冬中间培育成活率比较
    至1999年8月中旬，鲍苗长到1．5cm以上开始剥离筛选。
杂交苗仅10个池，筛选计数49．47万粒，成活率高达66．94％，其中1cm以上占45．79％。而自交组经第1次剥离，进入中问培育28万粒苗，到第2次剥离筛选只剩下1．74万粒，成活率仅为6．21％，规格达1cm以上，仅占13．79％。从越冬后成活率看，杂交苗成活率达95％，而自交为70％，相差25％。2.5 杂交组与自交组生长速度比较
    从孵化至7月中旬，杂交组与自交组生长速度差别不明显。从7月中旬至越冬中间培育前的适温生长期，杂交组平均生长速度明显快于自交组，能相差0．5cm左右，至海上养成前，杂交组平均壳长较自交组长0．8cm左右。
    3讨论 
    3．1实践表明，日本盘鲍同本地皱纹盘鲍只要亲鲍规格适宜、贮养得当，是可以实现同步产卵排精，并可顺利受精孵化，培育出杂交子一代，不论正交或反交均可达到杂交育种的目的。我们根据两者的生物学零度和成熟积温不同，控制促熟的升温幅度和天数，以便其能同步产卵排精。3．2经过2年试验性生产，我们发现杂交组合所产生的后代，尤其是正交组合皱(♀)×日(♂)所产生的子代在抗病力、生长速度、成活率等方面有着明显的优势。自交组由于近亲交配，在种质上体现退化现象。因此通过杂交培育新品种是种质优化复壮的重要途径。实践证明，稚的剥离后30～60天，是死亡高峰期。因为剥离的机械损伤和此时正处于高温期疾病多发期，很多场家鲍的自交后代由于抗病力差，剥离后30～60天，死亡率很高，至第2次剥离筛选成活率甚至低于10％。我们的自交试验也证明了这一点，而杂交组合的成活率高达60％，其抗病优势是显而易见的。在海上养成阶段，杂交组合所育鲍苗在抗病力、生长速度方面明显优于自交组合，相对降低了生产成本，缩短了育苗养成周期。
   3．3　2年的试验证明，用本地皱纹盘鲍同日本盘鲍杂交产生的子一代在性状上明显优于自交鲍苗，但必须每年更新杂交亲鲍，也就是说，杂交优势还不能在子二代身上稳定表现。以杂交手段来进一步提纯复壮是十分复杂的工程，要经过多代自交、回交等遗传学方法，才能获得性状优良稳定的种质，这需要运用分子生物学手段和较长时间进行研究。因此，我们将该项杂交育苗技术进行工厂化生产性推广、创造经济效益的同时，将与有关大学、院；所联合对鲍的杂交育种继续进行研究，以期找到性状更加优良、稳定的新品种。



                                    编辑:龙斌